TUGAS PEMERIKSAAN TES TIBC DAN TES FIRITIN

       

HEMATOLOGI III

“PEMERIKSAAN FERRITIN DAN TIBC”

NAMA                     : VALANTINE WAAS

NIM                          : 18 3145 353 112

KELAS                     : 2018 C

STUDI D-IV TEKNOLOGI LBORTORIUM MEDIS

FAKULTAS FARMASI, TEKNOLOGI RUMAH SAKIT DAN INFORMATIKA

UNIVERSITAS MEGA RESKY

MAKASSAR

2020

 

    

A.    Pemeriksaan Ferritin

1.                Pra Analitik

a.       Persiapan Pasien : pasien berpuaasa paling tidak 12 jam sebelum di ambil darah

b.      Tes fernitin lebih akurat  saat di lakukan pagi hari sebelum sarapan

c.       Metode : ELISA Double Sandwich

d.      Prinsip kerja : pemeriksaan fernitin serum memakai metode ELLISA dengan cara dounble sandwich. Antibody dengan hight affinity terhadap ferrnitin  atau antiferitin igG akan berikatan dengan ferritin serum dan selanjutnya dilabel dengan enzim horseradish peroxidase dan di baca absorbanya pada panjang gelombang 492 nm.

e.       Reagen :

1)      Preparat antiferitin Ig G yang di konjungasi dengan horseradish peroxidase

2)      Larutan fernitin di buat dengan cara :

a)       Encerkan Human ferritin 200 ul/ml ke dalam 10 ug/ml dalam 0, 05 mol/l larutan sodium  barbitone yang terdiri dari 0,1 mol/l NaCL 0, 02% NaN dan BSA 5 gr/dl, Ph di sesuaikan sampai ph 8 dengan menambahkan HCL 5 mol/l

b)      Bagi dalam 200 tabung kecil , masing masing berisi (200 ul, tutup rapat dan tahan sampai 1 tahun pada suhu 4 derjat C

c)      Jika di pakai, encerkan dengan buffer B  SAMPAI 1000 Ul/l dan siapkan larutan dalam range 0,2-25 ug/l  di bandingkan  dengan standar WHO untuk uji serun ferritin 94/572)

3)       Buffer A : phosphate-buffered saline ph 7.2

4)       Buffer B : 5 gram BSA ( bovine serum albumin ) dalam 1 liter buffer A

5)       Buffer C : carbonate bufer Ph 9,6

6)       Buffer D : Citrate phosphate buffer  PH

7)       Larutan substrat 

2.               Analitik  

a                a. Lapisi microtiter plate dengan cara :

1)      Preparat antiferitin Ig G di encerkan dengan 2 ul/ ml buffer C, tambahkan 200 ul ke dalam tiap-tiap sumuran.

2)      Tutup dan inkubasi semalaman pada suhu 4⁰ kosongkan sumuran dengan cara di balik-balik dan di-tapping pada handuk kering

3)      Tambahakan 200 ul 0, 05 % BSA dalam buffer C, diamkan 30 menit pada suhu ruangan

4)      Cuci tiap sumuran  dengan buffer A Sampai 3x . plate dapat di simpan 1 minggu pada tempat kering dan suhu 4 derajat C

b.Encerkan 50 ul serum pasien dengan 1 ml buffer B

c. Tambahkan 200 ul larutan standar dan serum pasien ke dalam tiap sumuran  dalam waktu 20 menit

d.            Tutup dan diamkan selama 20 menit pada suhu kamar dan jaukan dari sinar matahari

e. Kosobgkan sumuran dan cuci 3 kali dengan buffer A

f. Tambahkan  200 ul preparat konjungasi antiferritin Ig G dengan horseradish peroxidase yang sidah di encerkan, tutup dan diamkan selama 2 jam pada suhu kamar

g.Cuci 3x dengan buffer A

h.Tambahkan 200 ul larutan substrat pada tiap-tiap sumuran untuk menghentikan raksi

i.  Tunggu 30 menit dan baca absorbanya 492 nm dengan microtiter plate reader, atau ambil 200 ul larutan dari tiap sumuran  dan  masukan dalam 800 ul air , baca dengan fotometer.

1   Pasca Analitik

a.       Pria : 18- 270 mcg/L

b.      Wanita : 18- 160  mcg/L

c.       Anak-anak : 7-140 mcg/L

d.      Bayi usia – 5 bulan : 50-200 mcg/L

e.       Bayi baru lahitr : 25-200 mcg/L

A.            Pemeriksaan TIBC

1.      Pra analitik

a.       Persiapan Pasien : tidak ada persiapan khusus untuk pemeriksaan

b.      Pengambilan spesimen : pengambilan specimen di vena cubiti

c.       Metode : saturasi

d.      Prinsip kerja : serum di tambahakan kelebihan besi  atau Ferriklorid. Besi yang tidak terikat  transferrin akan diabsorbsi oleh magnesium carbonate, kemudian kadar besi serum di ukur

e.       Persiapan alat dan bahan :

1)      Spektrofotometer

2)      Centrifuge

3)      Spuit 3 cc

4)      Tourniquet

5)      Tabung reaksi

6)      Kapas alcohol

7)      Mikropipet 1000 μL, 20 μL

8)      Tip

9)      Reagen Basic magnesium carbonate

10)  Saturating solution

11)  deionized water

12)  HCl

13)  larutan standar

14)  Saturating iron solution

2.      Analitik

a                a.     Diasiapkan alat dan bahan yang akan digunakan

b.      Di pipet ,5 ml serum ke dalam tabung reaksi

c.       Di tambahkan 0,5 ml/ saturating iron solution

d.      Di campur dan di diamkan 15 menit pada suhu ruangan

e.       Di tambahkan 100 mg magnesium carbonate dan di homogenkan

f.       Diamkan selam 30 menit, sesekali di homogenkan

g.      Di sentrifus ,13. 000 selama 4 menit

h.      Di ambil 0,5 ml larutan kromogen tunggu hingga 10 menit

i.        Di baca absorbans pada panjang gelobang 562 nm.

3.      Pasca Analitik

Nilai rujukan 47-7 µmol / L